همسانه‌سازی ژن SOX2 انسانی در ناقل لنتی ویروسی و القای ژنی در سلول‌های HEK293T

  چکید ه   سابقه و هدف   ژن SOX2 در میان گونه‌ها، حفاظت شده بوده و از فاکتورهای مهم در القای سلول‌های پیش‌ساز از سلول‌های تمایز یافته می‌باشد که موجب حفظ خاصیت پرتوانی سلول‌های پیش‌ساز می‌شود. SOX2 ، OCT4 ، cMYC و KLF4 سبب باز برنامه‌نویسی سلول‌های سوماتیک به سلول‌های بنیادی می‌شوند. امروزه از ژن SOX2 در جهت تولید سلول­های iPS و سلول درمانی استفاده می‌شود. در این تحقیق همسانه‌سازی ژن SOX2 در ناقل لنتی ویروس و آلوده‌سازی سلول‌های HEK293T بررسی شد.     مواد و روش‌ها   در یک مطالعه تجربی، توالی کدکننده ژن SOX2 سنتز و در ناقل همسانه‌سازی pUC57 دریافت گردید. ژن ساختـه شده در ناقل بیانی لنتی ویروس pLEX-MCS ساب ـ کلون شد. سازه نوترکیب توسط روش‌‌های PCR ، هضم آنزیمی و توالی‌یابی تایید شد. ذرات لنتی ویروس در سلول‌های تولید کننده HEK293T تولید شدند. از وکتور لنتی ویروسی حاوی ژن GFP به عنوان کنترل استفاده شد. سلول‌های HEK293T توسط ذرات ویروسی آلوده شده و به وسیله مقاومت به آنتی‌بیوتیک پورومایسین انتخاب گردیدند. بیان SOX2 در سلول‌های HEK293T توسط RT-PCR بررسی شد.   یافته‌ها   سازه نوترکیب بیان‌کننده SOX2 ساخته و تایید گردید. سلول‌های HEK293T توسط ذرات ویروس آلوده شدند و پس از 24 ساعت، بیش از 90% سلول‌های HEK293T بیان GFP را از خود نشان دادند. با استفاده از روش RT-PCR بیان SOX2 در سلول‌های HEK293T تایید شد.   نتیجه گیری   سلول‌های HEK293T با موفقیت سازه‌های نوترکیب را دریافت و ژن‌های GFP و SOX2 را بیان نمودند.